睿创生物给您讲解植物组织样本的前处理
2024-05-09
一、匀浆介质
一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸盐缓冲液(PBS),客户可根据样本及测定指标的情况自行设定浓度,目的是保持样本的等渗环境。
二、组织匀浆的制备
1、取组织块（0.2g～0.5g）最少可到5～10mg在冰冷的PBS中漂洗，滤纸拭干，准确称重，放入5ml的匀浆管中。
2、按重量(g):体积(ml)=1:4的比例加入4倍体积的匀浆介质于匀浆管中，冰水浴条件下,用眼科小剪尽快剪碎组织块。
3、匀浆的方式：手工匀浆，机器匀浆。
手工匀浆：左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（6～8分钟），充分研碎，制成20%的匀浆液。
机器匀浆：用组织捣碎机10000～15000 转/分 上下研磨制成20%组织匀浆，也可用内切式组织匀浆机制备（匀浆时间10秒/次，间隙30秒，连续3～5次，在冰水中进行,可适当延长匀浆时间），
镜检观察:取少量组织匀浆作涂片（直接涂片、染色均可以），显微镜下观察细胞是否破碎，若没有则可延长匀浆时间。
4、将制备好的20%匀浆液用普通离心机或低温低速离心机4000转/分左右,离心10～15分钟，取上清液进行测定.
三、样本保存:
植物组织样本暂时不测定，可立即低温冻存，温度越低越好，中间如不fan复冻融，-20℃以下可保存三个月,-70℃以下可保存六个月。
制备好的匀浆液建议不要冻存,最好当天进行测定,如放置时间过长相关酶活会有所下降,部分指标4℃可存放3～5天(如SOD要存放2～3天,MDA可存放3～5,总蛋白测定可存5～7天等)
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