再与HRP标记的抗体结合,形成抗体抗原-酶标抗体复合物,经过洗涤后加底物TMB显色,TMB在HRP陆的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色,颜色的深浅和样品浓度呈正相关用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中浓度。

样品收集、处理及保存方法
1.细胞.上清液: 3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
2.组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清.
3.保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
试剂盒性能
1准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值大于等于09900.
2灵敏度:最di检测浓度小于1.0U/儿
3特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应
4.重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
5.贮藏:2-8°C,避光防潮保存。
6. 有效期:6个月

注意事项:
1.严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
⒉洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3.消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。
4.底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。
5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6.在储存和温育时避免强光直接照射。
7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8.任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
9.不能使用过期产品。
390.如果可能传播,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。